脱氧核糖核酸(DNA)检测试剂盒(二苯胺微板法)
产品简介:
脱氧核糖核酸中的α—脱氧核糖在酸性环境中变成ω—羟基—γ酮基戊醛与二苯胺试剂一起加热产生蓝色化合物,在595nm处有最大的吸收,在每毫升含DNA20~400微克范围内,光密度与DNA的浓度成正比,在反应液中加入少量乙醛,可以提高反应的灵敏度。除DNA外,脱氧木糖,阿拉伯糖也有同样的反应。
产品组成:
自备材料:
蒸馏水,96孔板,酶标仪,水浴锅或恒温箱等
操作步骤(仅供参考):
(1)配置显色剂:二苯胺试剂和乙醛试剂体积按照100:1进行混合即为显色剂。注意显色剂现配现用。
(2)按照如下表格配置,加入到96孔的微孔内,配置标准曲线微孔,然后混匀。建议每个浓度做2个复孔。
于60℃恒温水浴中保温1小时,冷却测0.D595nm值。以光密度为纵坐标,DNA含量(ug/ml)为横坐标,绘制标准曲线。
(3)样品的测定
取200毫升的待测液(内含DNA应在标准曲线可测范围之内50-200ug/ml,如果超过此浓度可用蒸馏水稀释)加至96孔微孔内,再加200毫升显色剂,混匀,其操作步骤与标准曲线的制作相同。根据测得的光密度值,从标准曲线上查出相当该光密度DNA的含量,按下式计算出样品中DNA的百分含量。
DNA含量/毫升(待测液)=标准曲线查得值×稀释倍数
注意事项:
1、二茉胺法测定DNA含量灵敏度不高,待测样品中DNA含量低于50mg/L即难以测定。乙醛可增加二苯胺法测定DNA的发色量,又可减少脱氧木糖和阿拉伯糖的干扰,能显著提高测定的灵敏度。
2、样品中含有少量RNA并不影响测定,但因蛋白质、多种糖类及其衍生物、芳香醛、羟基醛等能与二苯胺反应形成有色化合物,故能干扰DNA定理。
3、乙醛试剂容易因为长期储存挥发失效,建议-20℃ 避光.如果失效,可以自行配置1.6%的乙醛溶液。
产品简介:
脱氧核糖核酸中的α—脱氧核糖在酸性环境中变成ω—羟基—γ酮基戊醛与二苯胺试剂一起加热产生蓝色化合物,在595nm处有最大的吸收,在每毫升含DNA20~400微克范围内,光密度与DNA的浓度成正比,在反应液中加入少量乙醛,可以提高反应的灵敏度。除DNA外,脱氧木糖,阿拉伯糖也有同样的反应。
产品组成:
编号 名称 |
R200126-100T | Storage |
试剂(A):DNA 标准溶液 | 1ml | -20℃ 避光 |
试剂(B): 二苯胺试剂 | 25ml | 4-10℃ 避光 |
试剂(C): 乙醛试剂 | 1ml | -20℃ 避光 |
使用说明书 | 1份 |
蒸馏水,96孔板,酶标仪,水浴锅或恒温箱等
操作步骤(仅供参考):
(1)配置显色剂:二苯胺试剂和乙醛试剂体积按照100:1进行混合即为显色剂。注意显色剂现配现用。
(2)按照如下表格配置,加入到96孔的微孔内,配置标准曲线微孔,然后混匀。建议每个浓度做2个复孔。
管号 试剂 |
0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
DNA标准液(ul) | 0 | 10 | 20 | 40 | 50 | 60 | 80 | 100UL |
蒸馏水(ul) | 100 | 90 | 80 | 60 | 50 | 40 | 20 | 0 |
显色剂(ul) | 200 | 200 | 200 | 200 | 200 | 200 | 200 | 200UL |
(3)样品的测定
取200毫升的待测液(内含DNA应在标准曲线可测范围之内50-200ug/ml,如果超过此浓度可用蒸馏水稀释)加至96孔微孔内,再加200毫升显色剂,混匀,其操作步骤与标准曲线的制作相同。根据测得的光密度值,从标准曲线上查出相当该光密度DNA的含量,按下式计算出样品中DNA的百分含量。
DNA含量/毫升(待测液)=标准曲线查得值×稀释倍数
注意事项:
1、二茉胺法测定DNA含量灵敏度不高,待测样品中DNA含量低于50mg/L即难以测定。乙醛可增加二苯胺法测定DNA的发色量,又可减少脱氧木糖和阿拉伯糖的干扰,能显著提高测定的灵敏度。
2、样品中含有少量RNA并不影响测定,但因蛋白质、多种糖类及其衍生物、芳香醛、羟基醛等能与二苯胺反应形成有色化合物,故能干扰DNA定理。
3、乙醛试剂容易因为长期储存挥发失效,建议-20℃ 避光.如果失效,可以自行配置1.6%的乙醛溶液。
标题 | 操作 |
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