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新型冠状病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR，一步法）

产品编号：R200539 包装规格：25 次/50次试剂盒组成
组分	25 次	50 次	储存条件
ORF1ab Mix	350μl	700μl	-20℃,避光
N Mix	350μl	400μl	-20℃,避光
H2O (RNase free)	25μl	1200μl	-20℃
阳性对照	125μl	250μl	-20℃，避光
ROX Reference Dye	12.5μl	25μl	-20℃，避光
ROX Reference Dye I	12.5μl	25μl	-20℃，避光
操作手册	1 份	1 份

产品介绍

本试剂盒是根据中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所官方公布的新型冠状病毒核酸检测引物和探针序列（Specific primers and probes for detection 2019 novel coronavirus）以及WHO官方推荐检测标准设计。

试剂准备

自备耗材：不含RNase 的带吸头，不含RNase的EP管，PCR管等；
自备仪器：推荐使用ABI StepOnePlus、ABI7500 Fast、Bio-Rad CFX 系列、Roche LightCycler 系列荧光定量PCR仪器。

检测前须知

（1）本试剂盒仅适合于ABI StepOnePlus、ABI7500 Fast、Bio-Rad CFX 系列、Roche LightCycler 系列荧光定量PCR仪器，其他机器未验证过；

（2）用Bio-Rad CFX 系列、Roche LightCycler 系列机器检测时反应体系按照步骤中加入即可；

（2）用ABI StepOnePlus机器检测时反应体系中要除加入步骤中的各种成分外，还需要加入Dye A 0.25μl，那么25μl反转录体系中的H2O (RNase free)只需要加入17.25μl;

（3）用ABI7500 Fast机器检测时反应体系中要除加入步骤中的各种成分外，还需要加入Dye A 0.25μl，那么25μl反转录体系中的H2O (RNase free)只需要加入17.25μl。

步骤

1 样品：咽拭子、鼻拭子或痰液，最好是下呼吸道样品，采集的样品液体体积要足够用于检测（至少为2.5μl）。
2 参考如下表格中配置的25μl反转录体系，所有步骤都在冰浴上操作：
开放读码框1ab（ORF1ab）检测

ORF1ab Mix	14μl
患者样品（或阳性对照）	2.5μl
H2O (RNase free)	17.5μl
Total	25μl

开放读码框1ab（ORF1ab）检测

N Mix	14μl
患者样品（或阳性对照）	2.5μl
H2O (RNase free)	17.5μl
Total	25μl

3 轻轻混匀(用移液器轻轻吹打混匀或用涡旋混合器在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
4 按照如下表格步骤进行RT-PCR：

Temperature(℃)	Time(minute:second)	No. of cycle
37 90 60	10:00 3:00 5:00	1
95 60	0:05 0:30	40

5根据荧光定量PCR仪读取Ct值。

结果判定

阴性:无Ct值或Ct为40。
阳性：Ct值<37，可报告为阳性。
可疑：Ct值在37-40之间，建议重复实验，若重做结果Ct值<40，扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性,否则为阴性。