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Y187化学转化感受态细胞
Y187化学转化感受态细胞
英文名称: Y187 Chemically Competent Cell 
尺寸:  
特性: GAL4系统酵母单杂,双杂实验用菌株,MATα型,可通过mating操作进行筛库实验 
灭菌情况: 灭菌 
储存条件: 干冰运输,-80℃保存3个月 
1 产品介绍
基因型为:MATα, ura3-52, his3-200, ade 2-101, trp 1-901, leu 2-3, 112, gal4Δ, met-, gal80Δ, URA3::GAL1UAS-GAL1TATA
-lacZ,MEL1。
用途:GAL4系统酵母单杂,双杂实验用菌株,MATα型,可通过mating操作进行筛库实验
经pGADT7质粒检测转化效率高达104cfu/μg。
2 操作步骤:
3.1. 取100 µl冰上融化的感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 µg,Carrier DNA (95-100度5 min,快速冰浴,重复一次) 10 µl,PEG/LiAc 500µl并吸打几次混匀,30度水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
3.2. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
3.3. 5000 rpm离心 40 s弃上清,ddH2O 400 µl 重悬,离心 30s弃上清。
3.4. ddH2O 50 µl重悬,涂板,29℃培养48-96 h。 
3 注意事项:
3.1. 感受态细胞最好在冰上融化。
3.2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3.3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
3.4. Y187酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。
3.5. 菌落变粉不是污染,是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后,平板上的Adenine被酵母消耗完毕,酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用,然而,有些菌株的ADE2基因被破坏,Adenine合成途径受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR) 在细胞中积累而使菌落变为粉红色。3.6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29℃,48 h培养可见直径1 mm克隆;涂SD单缺平板29℃,48-60 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD双缺平板29℃,60-80 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90 h培养可见直径1 mm克隆。
 
 
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