简介：
血红蛋白(Hemoglobin，Hb或HGB)是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质，是能使血液呈红色的蛋白。血红蛋白由四条链组成，两条α链和两条β链，每一条链有一个包含一个铁原子的环状血红素。Hb在氧含量高的区域，容易与氧结合；在氧含量低的区域，又容易与氧分离。血红蛋白的这一特性，使红细胞具有运输氧的功能。血管溶血时，血浆游离血红蛋白(free hemoglobin)浓度增高。
游离血红蛋白检测试剂盒(邻-甲联苯胺比色法)(Free Hemoglobin Colorimetric Assay Kit的原理为：血红蛋白中亚铁血红素有类似过氧化物酶的作用,可在氧化剂的作用下催化邻-甲联苯胺(O-tolidine)产生蓝色产物,吸收峰在630nm。在酸性条件下产物呈黄色，吸收峰在435nm，产物黄色越深，说明FHB含量越高，反之则越低，通过分光光度比色法测定435nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出血浆游离血红蛋白含量水平。该试剂盒主要用于血浆样本，亦可用于细胞或组织的裂解液或匀浆液等样品中游离血红蛋白含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
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自备材料：
1、 恒温箱 2、 96孔板、酶标仪或分光光度计
操作步骤(仅供参考)：
1、 配制检测工作液：
① 配制显色工作液：取1支O-tolidine恢复至室温后，溶解于5ml FHB Assay buffer，即为显色工作液。配制好的显色工作液-20℃保存，一般1月内用完。(注：溶液为浑浊属于正常现象)
② 配制标准品工作液：取出Hb(1mg/ml)1支(10μl)恢复至室温，加入90μl ddH2O，即为标准品工作液(100μg/ml)。
2、 准备样品：
① 血浆、尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存。
② 细胞或组织样品：取恰当的细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-80℃冻存。
3、 加样：按照下表设置96孔板空白对照、标准品、待测样品，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的血红蛋白含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔，尤其是标准品应作三复孔。
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4、 每孔加入Acid Assay buffer，轻轻混匀。
5、 检测435nm处吸光度即A435，如果无法检测435nm，亦可检测425～445nm范围内吸光度，一般应数小时内检测完毕。
计算结果：
血浆游离血红蛋白(mg/L)=待测样品吸光度/标准品吸光度×100(mg/L)，一般＜40mg/L
注意事项：
1、 Hb(1mg/ml)和标准品工作液(100μl/ml)均应-20℃保存，同时应避免反复冻融。
2、 也可用分光光度计测定，但应根据比色杯的最小检测体积，尽量采用小体积的比色杯。
3、 1支显色工作液配制后应尽快用完，因此请注意适当多准备一些样品一起检测。
有效期：6个月有效。
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